1、劃不出單個(gè)菌落的原因:
(1)平板上有過(guò)多的水分;
(2)劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)未經(jīng)反復灼燒;
(3)多區劃線(xiàn),三區或四區劃線(xiàn)。
2、涂布和傾注的區別:
涂布利于觀(guān)察,但由于涂布棒上會(huì )帶有少量的菌液,可能影響計數的準確性;傾注更為準確,但不利于觀(guān)察菌落的狀態(tài)。
對霉菌計數來(lái)說(shuō),涂抹法有以下幾方面優(yōu)越于傾注法:
①培養出的霉菌菌落數較多;
②培養所需的時(shí)間較短;
③霉菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育完全,便于鑒定。
這是因為絕大多數霉菌是好氧的,在培養基表面生長(cháng)快,發(fā)育好,而混在培養基中發(fā)育就受影響,而且在培養基傾注時(shí)霉菌孢子易受熱損傷。
3、培養基的選擇:
培養基的選擇應根據實(shí)驗材料和檢驗目的來(lái)確定。培養基按微生物的種類(lèi)可分為細菌培養基、放線(xiàn)菌培養基、酵母菌培養基和霉菌培養基等四類(lèi)。常用的細菌培養基有營(yíng)養肉湯和營(yíng)養瓊脂培養基;常用的放線(xiàn)菌培養基為高氏1號培養基;常用的酵母菌培養基有馬鈴薯蔗糖培養基和麥芽汁培養基;常用的霉菌培養基有馬鈴薯蔗糖培養基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)瓊脂培養基和察氏培養基等。
4、培養基配制時(shí)應注意的問(wèn)題:
(1)滅菌溫度要嚴格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高,過(guò)高會(huì )導致糖分焦化,影響質(zhì)量;
(2)瓊脂培養基不能反復溶化。反復溶化會(huì )破壞培養基中的營(yíng)養成分;
(3)培養基不能反復滅菌,反復滅菌也會(huì )導致?tīng)I養成分的破壞;
(4)含瓊脂的培養基滅菌后,要搖勻。
5、培養溫度:
(1)細菌:36-37℃培養
(2)真菌類(lèi):25-30℃培養。
6、革蘭氏染色方法注意事項:
染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。
7、最適計數范圍:
細菌計數較為簡(jiǎn)單,霉菌計數問(wèn)題比較多見(jiàn)。因為霉菌菌落由孢子和菌絲組成,相當擴散,在直徑9cm的平皿里,菌落數稍多就相互交叉重疊,影響計數,但數量太少又會(huì )產(chǎn)生較大的誤差,因此選擇適當的稀釋度計數是保證結果準確的關(guān)鍵環(huán)節之一。
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